چگونه منبع مناسب سلول های CD34+ را برای تحقیق خود انتخاب کنید

adminدسامبر 4, 2023

18 خواندن این مطلب 7 دقیقه زمان میبرد

چگونه منبع مناسب سلول های CD34+ را برای تحقیق خود انتخاب کنید

این پست وبلاگ توسط STEMCELL Technologies نوشته شده است، که محصولات جداسازی سلولی، رسانه های کشت سلولی تخصصی، سلول های اولیه و معرف های پشتیبانی را برای استفاده در تحقیقات علوم زیستی در سراسر زنجیره از تحقیقات پایه تا ترجمه ارائه می دهد. خدمات سنجش قرارداد درون سازمانی STEMCELL Technologies (CAS) با شما همکاری می کند تا کارایی و مطالعات ایمنی آزمایشگاهی را برای کشف و توسعه دارو طراحی و انجام دهد.

سلول های بنیادی و پیش ساز خون ساز چیست؟

سلول های بنیادی خونساز (HSCs) به دلیل سابقه تحقیقاتی طولانی خود، جزو بهترین جمعیت سلول های بنیادی هستند.¹ HSC ها جمعیت کوچکی از سیستم خونساز را تشکیل می دهند، اما پتانسیل ایجاد همه انواع خون و سلول های ایمنی بالغ را دارند. سلول‌های اجدادی کوتاه‌مدت نیز بخشی از سیستم خونساز هستند و باعث ایجاد انواع سلول‌های خاص دودمان می‌شوند. در مجموع، این سلول ها سلول های بنیادی و پیش ساز خونساز (HSPCs) نامیده می شوند.

HSC ها با توانایی خود در خود تجدید و بازسازی سیستم خون ساز پس از پیوند تعریف می شوند، مشخصه ای که اساس سنجش in vivo را تشکیل می دهد که عملکرد HSC را بررسی می کند. در محیط‌های تجربی، توانایی HSCهای انسانی برای بازگرداندن خون‌سازی با پیوند به موش‌های دارای نقص ایمنی ژنتیکی، مانند موش‌های NOD-SCID-Gamma (NSG) و اندازه‌گیری حضور سلول‌های خون انسان در خون یا مغز استخوان (BM) اندازه‌گیری شد. پس از دوره های طولانی پیوند (20 هفته یا بیشتر). پیوند In vivo تا به امروز بهترین روش برای اندازه گیری عملکرد HSC است، اما برای استفاده معمول در آزمایشگاه بالینی گران و غیرعملی است. بنابراین، سنجش آزمایشگاهی اغلب به عنوان جایگزین استفاده می شود.

روش تشکیل کلونی (CFU) برای اولین بار در سال 1979 توصیف شد و پرکاربردترین روش در شرایط آزمایشگاهی برای HSPC است.² سنجش CFU الگوی تکثیر و تمایز پیش سازهای خونساز را با ارزیابی توانایی آنها برای تشکیل کلونی در یک محیط نیمه جامد متیل سلولز مانند MethoCult™با سیتوکین های مناسب تکمیل شده است (شکل 1 را ببینید). STEMCELL Technologies طیف وسیعی از سیتوکین ها و فاکتورهای رشد را برای جریان های کاری مانند این ارائه می دهد – نمونه خود را اینجا درخواست کنید نشان داده شده است که محتوای CFU محصولات سلولی با پیوند موفقیت آمیز HSPC مرتبط است.³ کلنی های مشتق شده از انواع مختلف سلول های پیش ساز بر اساس معیارهای مورفولوژیکی و فنوتیپی طبقه بندی و شمارش می شوند. سنجش CFU به طور گسترده برای مطالعه اثرات فاکتورهای رشد محرک و بازدارنده، غربالگری ترکیبات جدید برای پیش بینی سمیت بالقوه برای سیستم خونساز، و آزمایش اثرات دستکاری های مختلف در شرایط آزمایشگاهی (مانند پردازش سلول، انجماد، انتقال ژن، و انتقال ) روی محصولات سلولی مورد استفاده در پیوند سلول های خونساز. از STEMCELL بازدید کنید مرکز آموزشی کشف دارو و تست سمیت برای یادگیری بیشتر

می‌توانید درباره خون‌سازی، سنجش‌های مورد استفاده برای شناسایی و تعیین کمیت HSPCهای انسانی، و نحوه شناسایی و شمارش کلونی‌ها در سنجش CFU با STEMCELL اطلاعات بیشتری کسب کنید. دوره آموزشی تجزیه و تحلیل CFU در صورت درخواست.

CD34 چیست؟

نشانگرهای سلولی که به عنوان آنتی ژن های سطحی نیز شناخته می شوند، مولکول هایی هستند که بر روی غشای سلولی قرار دارند که برای شناسایی انواع سلول های خاص، اصل و نسب آنها و مرحله آنها در فرآیند تمایز با توجه به وجود یا عدم وجود بیان آنها استفاده می شود. یک مثال فسفوگلیکوپروتئین گذرنده CD34 است که برای اولین بار بر روی HSPCها شناسایی شد و بیان آن در بافت خونساز و عروقی یافت شد.

CD34 یکی از رایج ترین نشانگرهای سطح سلولی مورد استفاده برای شناسایی HSPC های انسانی است که بر روی HSC ها، سلول های چند توان و سلول های پیش ساز متمایزتر از دودمان سلول های خونی متمایز بیان می شود. نشانگرهای اضافی را می توان برای تشخیص زیرمجموعه های HSPC در جمعیت CD34+ و جداسازی HSPC ها با توانایی های پیوند و ظرفیت متفاوت برای گسترش یا تولید سلول های خونی بالغ در کشت استفاده کرد. با این روش در مورد فنوتیپ ها، فرکانس ها و سلسله مراتب HSPC انسان بیشتر بیاموزید نمودار دیواری شکل 1 تصاویری از کلنی های CFU HSPC ها را نشان می دهد که سطوح مختلف پروتئین CD34 را بیان می کنند. این تصاویر با STEMvision™ – ابزاری که برای خودکارسازی و استانداردسازی تجزیه و تحلیل CFU طراحی شده است.

**شکل 1. فرکانس CFU سلول های CD34+ طبقه بندی شده.** سلول‌های خون بندناف CD34+ (CB) در محیط StemSpan™-XF با مکمل گسترش CD34+ و UM171 به مدت 7 روز قبل از رنگ‌آمیزی با آنتی‌بادی ضد CD34 و سلول‌های حجیم و منفرد برای CD34 طبقه‌بندی شدند.^بالا CD34^عسل و CD34^منفی سلول ها در سنجش CFU (الف) تصاویری از کلنی‌های CFU که از سلول‌های دسته‌بندی شده به‌دست آمده‌اند. (ب) فرکانس CFU هر جمعیت طبقه بندی شده تک سلولی با سطوح مختلف بیان CD34. GEMM: گرانولوسیت، گلبول قرمز، مونوسیت، مگاکاریوسیت، BFU-E: واحد تشکیل دهنده انفجار اریتروئید، CFU-GM: واحد تشکیل دهنده کلنی-گرانولوسیت-ماکروفاژ، CFU-M: واحد تشکیل دهنده کلنی-مگاکاریوت، CFU-G: – تشکیل واحد گرانولوسیت.

فن آوری های STEMCELL طیف وسیعی از منابع را فراهم می کند که محققان می توانند به آنها دسترسی داشته باشند سلول های CD34+از جمله تازه یا منجمد لکوپاکس. مجموعه ما همچنین شامل طیف وسیعی از محصولات برای تهیه سلولی و جداسازی، گسترش و تمایز و تجزیه و تحلیل HSPCها است. برای اطمینان از استانداردسازی در تحقیقات HSPC خود، از محصولات STEMCELL از ابتدا تا انتها در گردش کار خود استفاده کنید (شکل 2).

**شکل 2. نمونه ای از گردش کار محصول برای تحقیقات سلول های خونساز و ژن درمانی.** با یک منبع قابل اعتماد از HSPC ها با استفاده از فرآورده های خونی تازه یا منجمد انسان، از جمله MNCs و leukopaks شروع کنید. سلول‌های CD34+ را می‌توان با استفاده از کیت‌های جداسازی سلولی ایمونومغناطیسی EasySep از این منابع جدا کرد. روش دیگر، با سلول های آماده برای استفاده اولیه CD34+ انسان شروع کنید. سلول‌های CD34+ انسان را می‌توان در شرایط بدون سرم با محیط‌ها و مکمل‌های StemSpan – مانند cGMP، محیط StemSpan™-AOF بدون حیوانات – یا اگر با سلول‌های بنیادی پرتوان کار می‌کند، با کیت‌های STEMdiff™ مخصوص دودمان، گسترش یا تمایز داد. سلول‌های CD34+ مشتق از سلول‌های اولیه را می‌توان با استفاده از سیستم ArciTect™ CRISPR-Cas9 به طور مؤثر ژن ویرایش کرد. سلول‌های CD34+ اصلاح‌نشده و ژنتیکی شده را می‌توان در محیط MethoCult™ کشت و با استفاده از ابزار STEMvision™ تجزیه و تحلیل کرد، که اکنون با یک پلاگین نرم‌افزار برای استفاده در محیط‌هایی با سازگاری بالا در دسترس است. تجزیه و تحلیل با مجموعه وسیع آنتی بادی های فلوسیتومتری ما برای شناسایی جمعیت های HSPC موجود پس از کشت یا اندازه گیری پیوند پس از پیوند در موش های دارای نقص ایمنی هنگام انجام سنجش پیوند درون تنی انجام دهید. MNCs BM: سلول های تک هسته ای مشتق از مغز استخوان، PB MNCs: سلول های تک هسته ای مشتق از خون محیطی.

منابع بافتی HSPC چیست؟

HSPC ها را می توان از منابع مختلفی از جمله CB، BM و خون محیطی (PB) به دست آورد. BM محل اصلی خون سازی در انسان پس از تولد است و تعداد بسیار کمی از HSPCها در PB یافت می شوند. با این حال، HSPC ها را می توان از BM بسیج کرد و پس از تزریق سیتوکین ها (به ویژه فاکتور تحریک کننده کلنی گرانولوسیت (G-CSF) و/یا سایر عوامل) در خون محیطی آزاد شد. برای این منظور، اهداکنندگان بر اساس رژیم‌های خاص با عوامل بسیج زیر بسیج می‌شوند:

G-CSF – سیتوکین G-CSF متداول ترین عامل بسیج کننده و استاندارد طلایی در کلینیک است.
Plerixafor – مولکول بی سیکلام plerixafor یک عامل تحریک کننده سریع است.
ترکیب – ترکیب G-CSF و پلریکسافور به طور هم افزایی برای افزایش موبیلیزاسیون CD34+ در مقایسه با تک عاملی عمل می کند.

HSPCهای موبیل‌شده PB (mPB) را می‌توان با آفرزیس برداشت کرد و منبع اصلی HSPCها برای پیوند بالینی برای درمان بدخیمی‌های خونی و سایر اختلالات سلول‌های خونی هستند. CB بند ناف همچنین به عنوان منبع جایگزین HSPCهای آلوژنیک برای بیمارانی که در آنها اهداکننده BM یا mPB مناسب در دسترس نیست، استفاده شده است. BM، mPB و CB نیز اغلب برای تحقیقات پایه در زیست شناسی HSC و توسعه برنامه های کاربردی سلول درمانی جدید، به عنوان مثال، استفاده می شوند. گسترش HSC و ژن درمانی

جدول 1 برخی از مزایا و معایب منابع مختلف سلول های CD34+ را نشان می دهد. مناسب ترین انتخاب برای تحقیق شما به عوامل مختلفی مانند برنامه کاربردی، اهداف تحقیق و البته در دسترس بودن سلول ها از هر منبع بستگی دارد.

جدول 1. منابع سلول های CD34+ و ویژگی های مربوط به آنها

برای پرسش‌ها و پاسخ‌های متداول‌تر درباره leukopaks، CB و BM، یا برای کسب اطلاعات بیشتر در مورد سلول‌های اولیه STEMCELL، ما را بخوانید. سوالات متداول سلول اولیه

STEMCELL Technologies کیست؟

فن آوری های STEMCELL از سازمان های دارویی، بیوتکنولوژی، دولتی و دانشگاهی علوم زیستی در سراسر جهان با بیش از 2500 محصول و خدمات تخصصی پشتیبانی می کند. منابع اخلاقی ما مجموعه ای از سلول های اولیه انسانی شامل محصولات تازه یا منجمد PB، CB و BM است. ما طیف وسیعی از محصولات را ارائه می دهیم که به شما کمک می کند تا سلول ها را با اطمینان ذوب کنید. به حداکثر رساندن بازیابی و زنده ماندن سلول پس از ذوب با آماده برای استفاده محیط CryoStor® CS10. سیستم‌های ذوب سلولی خودکار خطر آلودگی را از بین می‌برند و پروفایل‌های ذوب ثابتی را ارائه می‌کنند ThawSTAR® CFT2 برای ویال های برودتی و ThawSTAR® CB برای بسته های کرایو با حجم زیاد.

متخصص در سنجش سلولی اولیه، داخلی ما خدمات تجزیه و تحلیل قرارداد (CAS) برای طراحی و انجام مطالعات توسعه داروی شما با شما همکاری می کند. داده های مورد نیاز خود را با انتخاب از مجموعه سنجش های استاندارد شده ما دریافت کنید یا در مورد نیازهای سفارشی خود با کارشناسان علمی ما صحبت کنید.